磷酸化多抗和單抗的制備

蛋白質(zhì)的翻譯后修飾在蛋白質(zhì)組學(xué)研究領(lǐng)域具有重要地位，近年來(lái)表現(xiàn)出更為火爆的趨勢(shì)。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)在翻譯后會(huì)在不同的基團(tuán)上發(fā)生不同的修飾，如磷酸化、糖基化、甲基化、乙?；?。蛋白質(zhì)磷酸化是各種蛋白質(zhì)修飾方式中zui為常見(jiàn)、zui重要的一種，它由蛋白激酶和磷酸酶，這兩個(gè)作用相反的酶系構(gòu)成，是一個(gè)可逆的過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)的可逆磷酸化幾乎涉及到生物體內(nèi)多種生理和病理過(guò)程，如糖代謝、光合作用、細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、基因表達(dá)、神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放，甚至癌變等等，在細(xì)胞的信號(hào)傳遞過(guò)程中占有極其重要的地位，是細(xì)胞生命活動(dòng)的調(diào)控中心。磷酸化的抗體可以特異性的識(shí)別蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)，可以作為蛋白質(zhì)是否磷酸化的重要檢測(cè)工具，而且可以在避免放射性污染的情況下，對(duì)磷酸化蛋白進(jìn)行定性和定量分析，因此特異性磷酸化抗體是研究蛋白質(zhì)磷酸化的重要工具。

    磷酸化抗體和非磷酸化抗體在研究中的應(yīng)用各有不同，制備工藝上也有所區(qū)別，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

   1、磷酸化抗體是針對(duì)蛋白磷酸化位點(diǎn)設(shè)計(jì)制備的，主要用于檢測(cè)蛋白磷酸化的變化情況。

   2、非磷酸化抗體（普通抗體）是針對(duì)蛋白非磷酸化位點(diǎn)設(shè)計(jì)制備的，主要檢測(cè)組織或細(xì)胞中該蛋白的表達(dá)情況，組織特異性或亞細(xì)胞地位，也可以作為磷酸化水平變化的內(nèi)參等。

   3、普通抗體的合成：蛋白或者偶聯(lián)多肽->免疫動(dòng)物->收獲多抗（細(xì)胞融合->腹水制備->單抗純化）。

   4、磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點(diǎn)的多肽->人工體外磷酸化->多肽偶聯(lián)載體->免疫動(dòng)物->收獲多抗（細(xì)胞融合->腹水制備->單抗純化）。